簡要描述:熒光定量PCR技術(shù)服務(wù)技術(shù)于1996年由美國Applied Biosystems公司推出,由于該技術(shù)不僅實(shí)現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍,而且與常規(guī)PCR相比,它具有特異性更強(qiáng)、有效解決PCR污染問題、自動(dòng)化程度高等特點(diǎn),目前已得到廣泛應(yīng)用。
熒光定量PCR技術(shù)服務(wù)SYBR Green特性:
(1)只有和雙鏈DNA結(jié)合后才發(fā)熒光。
(2)變性時(shí),DNA雙鏈分開,無熒光。
(3)在延伸結(jié)束階段采集熒光信號(hào)。
(4)SYBR Green也能和非特異性的雙鏈DNA結(jié)合發(fā)光,所以必須在反應(yīng)結(jié)束時(shí)做熔解曲線分析。
熒光定量PCR技術(shù)服務(wù)PCR技術(shù)于1996年由美國Applied Biosystems公司推出,由于該技術(shù)不僅實(shí)現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍,而且與常規(guī)PCR相比,它具有特異性更強(qiáng)、有效解決PCR污染問題、自動(dòng)化程度高等特點(diǎn),目前已得到廣泛應(yīng)用。
TaqMan探針的特性:
(1)5′端標(biāo)記有報(bào)告基團(tuán)(Reporter, R),如FAM、VIC等
(2)3′端標(biāo)記有熒光淬滅基團(tuán) (Quencher, Q)
(3)探針完整,R所發(fā)射的熒光能量被Q基團(tuán)吸收 ,無熒光, R與Q分開,發(fā)熒光(4)Taq酶有 5′→3′外切核酸酶活性,可水解探針。
定量的標(biāo)準(zhǔn)樣品:
(1)含有和待測樣品相同擴(kuò)增片段的克隆質(zhì)粒
(2)含有和待測樣品相同擴(kuò)增片段的cDNA
(3)PCR的產(chǎn)物,可分別做系列稀釋。