簡要描述:改進(jìn)的異硫氰酸胍/酚一步法裂解細(xì)胞和滅活RNA 酶, 然后總RNA在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于離心柱內(nèi)硅基質(zhì)膜, 再通過一系列快速的漂洗-離心的步驟, 去蛋白液和漂洗液將細(xì)胞代謝物、蛋白等雜質(zhì)去除, Z后低鹽的RNase free water將純凈RNA從硅基質(zhì)膜上洗脫。
多糖多酚植物總RNA快速提取試劑盒(離心柱型)
下載說明書
產(chǎn)品編號 | 包裝 | 價格 |
RP3201 | 20次 | 詢價 |
RP3202 | 50次 | 詢價 |
試劑盒組成:
試劑盒組成 | 保存 | 20次(RP1201) | 50次 (RP1202) |
裂解液RL | 4℃避光 | 25 ml | 55 ml |
沉淀劑A | 室溫 | 2 ml | 4 ml |
去蛋白液RE | 室溫 | 15ml | 30ml |
漂洗液RD | 室溫 | 20ml | 40ml |
漂洗液RW | 4℃(一個月) | 6 ml | 15 ml |
*次使用前按說明加量乙醇 | |||
RNase-free H2O | 室溫 | 5 ml | 10ml |
70%乙醇 | 室溫 | 4ml RNase-free H2O | 9ml RNase-free H2O |
*次使用前按說明加量乙醇 | |||
RNase-free 吸附柱RA | 室溫 | 20個 | 50個 |
收集管(2ml) | 室溫 | 20個 | 50個 |
產(chǎn)品說明:
改進(jìn)的異硫氰酸胍/酚一步法裂解細(xì)胞和滅活RNA 酶, 然后總RNA在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于離心柱內(nèi)硅基質(zhì)膜, 再通過一系列快速的漂洗-離心的步驟, 去蛋白液和漂洗液將細(xì)胞代謝物、蛋白等雜質(zhì)去除, zui后低鹽的RNase free water將純凈RNA從硅基質(zhì)膜上洗脫。
植物組織RNA提取的難點
1、酚類化合物的干擾
許多植物組織特別是植物的果實和樹木類植物中富含酚類化合物。酚類物質(zhì)的含量會隨著植物的生長而增加。因而從幼嫩的植物材料中更容易提取RNA。此外,針葉類植物的針葉中多酚的含量比在落葉植物的葉子中要高得多。在植物材料勻漿時,酚類物質(zhì)會釋放出來,氧化后使勻漿液變?yōu)楹稚?,并隨氧化程度的增加而加深,這一現(xiàn)象被稱為褐化效應(yīng)(brownins effect)。被氧化的酚類化合物(如醌類)能與RNA穩(wěn)定地結(jié)合,從而影影響RNA的分離純化。
2、多糖的干擾
多糖的污染是提取植物RNA時常遇到的另一個棘手的問題.,植物組織中往往富含多糖,而多糖的許多理化性質(zhì)與RNA很相似,因此很難將它們分開。在去除多糖的同時RNA也被裹攜走了,造成RNA產(chǎn)量的減少:而在沉淀RNA
時,也產(chǎn)生多糖的凝膠狀沉淀,這種含有多糖的RNA沉淀難溶于水,或溶解后產(chǎn)生粘稠狀的溶液。由于多糖可以抑制許多酶的活性,因此污染了多糖的RNA樣品無法用于進(jìn)一步的分子生物學(xué)研究。
3、蛋白雜質(zhì)的影響
蛋白質(zhì)是污染RNA樣品的又一個重要因素。由干RNase和多酚氧化酶亦屬于蛋白質(zhì),因而要獲得完整的、高質(zhì)量的RNA就必須有效地去除蛋白雜質(zhì)。
4、次級代謝產(chǎn)物的影響
從植物組織中提取高質(zhì)量RNA的另一個難點是許多高等植物組織尤其是成熟組織能產(chǎn)生某些水溶性的次級代謝產(chǎn)物,這些次級代謝產(chǎn)物很容易與RNA結(jié)合并與RNA共同被抽提出來而阻礙具有生物活性的RNA的分離。
試劑盒特點:
◆ 快速去除多糖,上樣孔無多糖污染:
◆ *多酚沉淀劑,防多酚氧化同時沉淀多酚:
◆ *漂洗液RD,特異性洗掉基因組,確保得到的RNA無基因組污染:
◆ 成功提取進(jìn)口TRIzol及Q公司試劑盒無法很好提取的多種植物RNA,包括仙人掌、仙人球、蘆薈、鳳梨、水仙、黃瓜、辣椒、胡蘿卜、玉米、大豆、百合、小麥、西紅柿、花菜、油菜籽等;
提取范圍:
仙人掌、仙人球、水仙、黃瓜、胡蘿卜、辣椒、西紅柿、煙草、玉米、大豆、百合、小麥、擬南芥和其他大多數(shù)植物。
產(chǎn)量:
每100mg組織10~50μg不等