為什么要進行細胞鑒定?
1.什么是細胞系鑒定?
所謂細胞系鑒定即通過STR(短串聯(lián)重復)圖譜所建立細胞系的遺傳特征。一株細胞系的遺傳特征確立后,細胞系可以通過定期的檢測,以防止出現(xiàn)細胞系被誤認或交叉污染的情況。
2.為什么要進行細胞系鑒定?
首先進行細胞系STR鑒定是很重要的。很多生物醫(yī)藥的研究都采用培養(yǎng)細胞來進行,這些細胞可能是受贈于其它研究人員,也可能是從細胞庫(如美國ATCC,AmericanTypeCultureCollection)得來。據(jù)估計,15-20%的實驗室,實驗中所使用的細胞已經(jīng)不是原來的細胞系,或者與其它細胞系發(fā)生了交叉污染。顯然,細胞系遭到污染、特征鑒別錯誤,將會極大的威脅著基于這些細胞而發(fā)表的論文質(zhì)量和研究發(fā)現(xiàn)的正確性。為此,很多細胞庫現(xiàn)在都要對提交來的細胞系進行鑒定,并對細胞系之間的交叉污染進行監(jiān)測。
現(xiàn)在很多機構(gòu)都已經(jīng)認識到這個的重要性,ATCC和FDA,這些機構(gòu)要求對用于制藥領(lǐng)域的實驗中所使用的材料—諸如細胞系—應該進行“身份鑒定”和純度測試。很多雜志也要求使用細胞系的文章提供STR指紋圖譜數(shù)據(jù)。
FDA建議研究人員在培養(yǎng)細胞的較早階段(細胞培養(yǎng)第一周)來鑒定細胞系的身份。細胞在被凍存前應再一次進行鑒定;對于活躍生長的細胞,每兩個月應鑒定一次;文獻發(fā)表前也應對細胞系身份進行鑒定。
如果一個實驗室使用不止一種細胞系,則應在實驗開始時,就要對所有的細胞系進行鑒定,以便排除交叉污染。
這樣將減少由于細胞系發(fā)生交叉污染或身份誤認,將導致實驗數(shù)據(jù)的無效或數(shù)據(jù)誤導。
3.如何進行細胞系鑒定?
細胞系鑒定目前主要基于身份認證委員會的標準。依據(jù)該標準,可以通過多重熒光PCR技術(shù),對人源8個STR位點以及1個性別決定位點進行檢測。
4.什么時候需細胞系鑒定?
1)當建立或獲得一個新的細胞系時;
2)一個涉及到細胞試驗項目開始/結(jié)束時;
3)在細胞凍存之前,或細胞已連續(xù)培養(yǎng)2~3個月時;
4)發(fā)表文章或申請課題經(jīng)費前;
5)細胞系表現(xiàn)不穩(wěn)定或結(jié)果與預期差別較大時;
6)當實驗室使用超過一種細胞系時,所有細胞系先鑒定以排除交叉污染的可能。