電泳的概念很簡(jiǎn)單。像離心一樣,分子感受到一個(gè)力向一個(gè)方向推動(dòng)它們。然而,在這種情況下,所涉及的力是由于作用在分子電荷上的電場(chǎng)引起的,并且由F = EQ給出,其中F是力,E是電場(chǎng),Q是電荷。 顯然,分子上的電荷越大,力就越大。因此,對(duì)于相同尺寸的兩個(gè)分子,具有較大電荷的分子將在電場(chǎng)中移動(dòng)得更快。
現(xiàn)在,不太明顯的是質(zhì)量較大的分子移動(dòng)得更慢。這實(shí)際上是因?yàn)闇p慢分子穿過(guò)溶液的摩擦力取決于分子的大小。分子通過(guò)溶液的速度取決于驅(qū)動(dòng)它向前的力剛好被運(yùn)動(dòng)產(chǎn)生的摩擦力平衡的點(diǎn)。分子的質(zhì)量越大,通常尺寸越大,因此當(dāng)通過(guò)溶液時(shí)分子將產(chǎn)生摩擦。
事實(shí)證明,實(shí)際上分子的電泳遷移率取決于其電荷與質(zhì)量比。具有相同電荷與質(zhì)量比的兩種不同尺寸的分子應(yīng)在均勻電場(chǎng)和**世界中以相同的遷移率運(yùn)行。事實(shí)證明,實(shí)際上分子的電泳遷移率取決于其電荷與質(zhì)量比。
為什么在電泳中使用TBE緩沖液?
限制性緩沖液將pH保持在適合酶活性的范圍內(nèi),并提供催化所需的鹽輔助因子。由于不同的限制性內(nèi)切酶需要不同的鹽條件和pH,因此可以使用單一的折衷緩沖液,其在各種限制性內(nèi)切酶優(yōu)選的條件之間達(dá)成平衡。
電泳是一種用于基于由于直流電流的影響而移動(dòng)生物分子的技術(shù)。該技術(shù)于1937年由瑞典化學(xué)家Arne Tiselius*推出,用于分離蛋白質(zhì)?,F(xiàn)在已擴(kuò)展到分離許多其他不同種類的生物分子,包括核酸,碳水化合物和氨基酸。電泳在基礎(chǔ)研究,生物醫(yī)學(xué)研究和臨床診斷疾病的實(shí)驗(yàn)室中變得越來(lái)越重要。電泳儀不常用于大量純化蛋白質(zhì),因?yàn)榇嬖诟?jiǎn)單,更快和更高效的其他方法。然而,作為檢測(cè)和定量混合物中許多生物分子的微量痕跡的分析技術(shù)是有價(jià)值的。它對(duì)確定某些物理性質(zhì)如分子量,等電點(diǎn)和生物活性也很有用。